半薄的部分，可從cryoprotected生物材料的冷凍塊切片在-90 ° C。 光學(xué)顯微鏡的使用這些路段的優(yōu)點(diǎn)是subcellullar形態(tài)保存和改進(jìn)的光學(xué)分辨率 。 化學(xué)固定的生物材料是cryoprotected浸泡在2.3米，蔗糖和浸泡在液氮中冷凍到標(biāo)本引腳 。 切片是執(zhí)行與調(diào)整，切較厚部分（0.3至1μm）的ultramicrotome的厚度控制在低溫- ultramicrotome。 一旦已取得的部分，他們是從使用蔗糖液滴的刀，但它們置于玻片上，而不是放在標(biāo)本電網(wǎng)。
玻片上應(yīng)注明對(duì)其中的部分將被放置標(biāo)記的玻璃，洗，然后外套的玻璃面的鉆石鉛筆 。 用洗滌劑和水清洗后，他們可能會(huì)涂要么明膠，聚- L -賴氨酸或阿爾辛藍(lán) 。 對(duì)于這些*，下降1％明膠被涂污在玻璃上使用的是第二張幻燈片和風(fēng)干的幻燈片 。 對(duì)于其他兩種方法，見下文。 涂層的幻燈片，可確保部分粘在標(biāo)簽過程的幻燈片。
免疫標(biāo)記的玻片上的冰凍切片 。
浸入幻燈片，與部分，成Coplin含有PBS JAR。 這將洗去蔗糖。
浸入到用含50毫米氯化銨在為了解渴自由醛基的幻燈片 。
浸入到PBS的幻燈片，包含阻斷劑（如1％明膠 ）。 刪除的幻燈片，幻燈片等的部分和他們周圍的區(qū)域保持濕干表面。 重要的是，部分沒有干出來的。
把加入10μl-20μL稀釋，離心抗體的上部分，在潮濕的氣氛中離開15分鐘到 24小時(shí)。
抗體洗凈，用新鮮的PBS（一個(gè)Coplin JAR） 。
重復(fù)抗體孵育和洗滌步驟與二級(jí)fluoresceinated抗體（步驟4和5）。
安裝在90％甘油的PBS的幻燈片，或沖洗水和含Moviol或Permount防褪色的化合物掛載。 這將產(chǎn)生一個(gè)*性的裝載熒光信號(hào)是不容易漂白，當(dāng)暴露在紫外線下 。
與自體熒光的問題
如果所研究的材料是用戊二醛固定，然后自體熒光將出席 。 這可以由0.1％硼氫化鈉的PBS（pH值8）治療的部分被刪除。 硼庫(kù)存解決方案，可以無限期地儲(chǔ)存在pH值12 。 在pH 7分子的半衰期為10秒。 在pH 8的半衰期為100秒。
如果從組織的自體熒光，然后金或酶標(biāo)記的抗體可以取代二次熒光抗體 。 在這樣的抗體結(jié)合可以可視化使用銀增強(qiáng)揭示的黃金，或產(chǎn)生酶細(xì)胞化學(xué)在組織切片的彩色反應(yīng)產(chǎn)物。
聚- L -賴氨酸涂層玻片
在100毫升蒸餾水溶解聚- L -賴氨酸10毫克。
保留干凈，標(biāo)志著幻燈片，在這30分鐘的解決方案。
無論是空氣干燥，不洗或沖洗蒸餾水簡(jiǎn)要 。
阿爾辛藍(lán)玻片上的涂層 。
0.5％阿爾辛藍(lán)原液
這個(gè)解決方案1:100用蒸餾水稀釋
在稀溶液中10分鐘，浸干凈，顯著的幻燈片。
簡(jiǎn)要蒸餾水沖洗幻燈片。 這洗之后，他們將繼續(xù)略帶藍(lán)色 。
晾干后方可使用，并且只使用新鮮配制的幻燈片。
