徠卡生物顯微鏡的光學技術參數(shù)
焦深為焦點深度的簡稱,即在使用徠卡生物顯微鏡時,當焦點對準一物體點時,不僅位于該點平面上的各點都可看清楚,而且在此平面上下一定厚度內(nèi),也能看得清楚,這個清晰部分的厚度就是焦深。焦深大,可看到被檢物體的全層,而焦深小,則只能看到被檢物體的一薄層。
1.焦深與總放大倍率及物鏡的數(shù)值孔徑值成反比,放大倍率愈高,數(shù)值孔徑值愈大,焦深則愈小。
2.焦深對條件的要求恰好與分辨率相反,分辨率高則焦深變小。因此,在使用高倍物鏡并求高度分辨率的觀察時,由于焦深小,必須運用細調(diào)焦裝置上下調(diào)節(jié),以觀察被檢物體的全層,彌補焦深小的缺陷。但是,在進行顯微照相時,則不能如此,而就當盡量利用焦深大的物鏡。如40×物鏡,數(shù)值孔徑有0.65、0.70.0.85.0.95四種類型,觀察時,選用NA為0.95的物鏡,可得到好的觀察效果;而顯微照相時,可根據(jù)制片情況適當選用NA值小的物鏡,才能得到比前者焦深大的效果。
3.被檢物體周圍介質(zhì)的折射率加大,可增大焦深。尤其在顯微照相時,更應考慮封片劑的使用。
徠卡生物顯微鏡的焦深即使是大的,實際上數(shù)值卻是很小的,只能看清楚幾個或十幾個微米薄層內(nèi)的物相。
在使用高倍鏡進行顯微照相時,焦深小時矛盾更為突出。因此,在使用100×的高倍物鏡時,可選用帶虹彩光闌的物鏡,以改變鏡口角的大小,從而改變NA值,以調(diào)節(jié)焦深的大小。
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